Kazalo:

Kako izbirate klone?
Kako izbirate klone?

Video: Kako izbirate klone?

Video: Kako izbirate klone?
Video: Клон (250 серия) (2001) сериал | ПОСЛЕДНЯЯ СЕРИЯ 2024, November
Anonim

Kdaj izbiranje a klon pazite, da so korenine močne, bele in vneto štrleče iz rastnega medija. Če so korenine rjave in zmečkane ali so drugače videti neaktivne, ga postavite nazaj in poiščite boljšo.

Poleg tega, kako klonirate eno celico?

  1. Preštejte celice, da postavite ~16 000 celic v prvo vdolbino (A1) plošče s 96 vdolbinicami, ki vsebuje 200 µL medija.
  2. Odstranite 100 µL iz celic, ki vsebujejo A1, in zmešajte z B1, pipetirajte gor in dol 3x, da se dobro premešate, preden odstranite 100 µL in zmešate s C1 itd.

Tudi, kako izbrati kolonijo celic sesalcev? Postavite ploščo pod mikroskop, da izberete nediferencirane zdrave kolonije . Izberite kolonije z uporabo pipete P-20, nastavljene na 10ul. Previdno izberite a kolonijo ne da bi razbili kolonijo v samsko celice in ga prenesite v ploščo s 96 vdolbinicami s tripsinom. Nekajkrat pipetirajte gor in dol, da razpršite kolonijo.

Ustrezno temu, kako uporabljate klonski cilinder?

Uporaba sterilne srednje klešče, vzemite a klonski cilinder . Nežno pritisnite na ravno dno cilinder v gladko silikonsko mast in jo odstranite z nenadnim navpičnim gibom. Če je opravljeno pravilno, se bo maščoba enakomerno porazdelila po dnu cilinder . Nastavite cilinder nad kolonijo.

Kako izbirate kolonije za stabilne celične linije?

Protokol za ustvarjanje stabilnih celičnih linij zahteva več korakov, kot je prikazano spodaj:

  1. Ustvarite krivuljo ubijanja, da določite optimalno koncentracijo izbranega antibiotika.
  2. Transficirajte celice z želenimi plazmidnimi konstrukti
  3. Izberite in razširite stabilne poliklonske kolonije.
  4. Identificirajte posamezne klone z omejenim redčenjem in razširitvijo.

Priporočena: