Kako deluje Sangerjevo zaporedje DNK?
Kako deluje Sangerjevo zaporedje DNK?

Video: Kako deluje Sangerjevo zaporedje DNK?

Video: Kako deluje Sangerjevo zaporedje DNK?
Video: Секвенирование ДНК по Сэнгеру (Sanger Sequencing) 2024, November
Anonim

Sangerjevo zaporedje povzroči tvorbo produktov raztezanja različnih dolžin, ki se končajo z dideoksinukleotidi na 3' koncu. Podaljški produkti se nato ločijo s kapilarno elektroforezo ali CE. Molekule se z električnim tokom vbrizgajo v dolgo stekleno kapilaro, napolnjeno z gel polimerom.

Kaj je na ta način Sangerjeva metoda sekvenciranja DNK?

Sangerjevo zaporedje , znan tudi kot zaključek verige metoda , je tehnika za Sekvenciranje DNK ki temelji na selektivni vključitvi dideoksinukleotidov, ki končajo verigo (ddNTP) z DNK polimeraza med in vitro DNK replikacijo. Razvil ga je Frederick Sanger in sodelavci leta 1977.

Prav tako, kako deluje sekvenciranje zaključka verige? Sangerjeva DNK zaporedje je znan tudi kot verigo - prekinitev metoda zaporedje . ddNTP-ji povzročijo prekinitev verige DNA, ker ddNTP nimajo skupine 3'-OH, potrebne za tvorbo fosfodiesterske vezi med nukleotidi. Brez te vezi, verigo nukleotidov, ki nastanejo, je prekinjeno.

Preprosto tako, zakaj delamo Sangerjevo zaporedje?

Sangerjevo zaporedje je a metoda od Zaporedje DNK temelji na selektivni vključitvi dideoksinukleotidov, ki končujejo verigo DNK polimerazo med in vitro DNK replikacijo. Še vedno ima prednost pred kratkim branjem zaporedje tehnologij (kot je Illumina), ki jih lahko proizvajajo Zaporedje DNK odčitkov > 500 nukleotidov.

Ali je Sangerjevo zaporedje natančno?

Sangerjevo zaporedje z 99,99 % natančnost je »zlati standard« za klinične raziskave zaporedje . Vendar pa novejše tehnologije NGS postajajo pogoste tudi v laboratorijih za klinične raziskave zaradi njihove večje zmogljivosti in nižjih stroškov na vzorec.

Priporočena: