Kaj se zgodi, če dodate preveč restrikcijskega encima?
Kaj se zgodi, če dodate preveč restrikcijskega encima?

Video: Kaj se zgodi, če dodate preveč restrikcijskega encima?

Video: Kaj se zgodi, če dodate preveč restrikcijskega encima?
Video: 4V4 UPDATE! 4 NEW ANIMATIONS! (Roblox Funky Friday) 2024, November
Anonim

Lahko pride do nepopolne prebave ko preveč oz tudi malo encim se uporablja. The prisotnost kontaminantov v the Vzorec DNK lahko zavirati encimi , kar ima za posledico tudi nepopolno prebavo. nekaj restrikcijskih encimov zahtevajo kofaktorje za polno aktivnost.

Poleg tega, zakaj so restrikcijski encimi dodani zadnji?

The restrikcijski encim je običajno zadnji komponento dodano na reakcijo, da se zagotovi, da ni izpostavljen ekstremnim razmeram. Sestavljeno reakcijo je treba pomešati encim dodatek. Zmešajte vse raztopine, ki vsebujejo restrikcijskih encimov nežno, da bi se izognili encim inaktivacija.

Poleg tega, kako je mogoče izboljšati prebavo omejevalnih encimov? Uporabljajte ne več kot je priporočeno encim količino (npr. 10 enot encim na mikrogram DNK). Zmanjšajte količino encim v reakciji, če je potrebno. Izogibajte se dolgotrajni inkubaciji prebavo reakcijo. Uporabite priporočeni reakcijski pufer.

Vedite tudi, zakaj se restrikcijski encim ne bi zmanjšal?

Priprava DNK, ki jo je treba cepiti bi moral ne smejo vsebovati kontaminantov, kot so fenol, kloroform, alkohol, EDTA, detergenti ali prekomerne soli, ki lahko vplivajo na restrikcijski encim dejavnost. Če je prisoten inhibitor (pogosto sol, EDTA ali fenol), bo kontrolna DNK ne rezati po mešanju.

Zakaj lahko količina encima povzroči aktivnost zvezd?

Zvezdna dejavnost je sprostitev ali sprememba specifičnosti omejitve encim posredovano cepitev DNK, ki lahko se pojavijo pri reakcijskih pogojih, ki se bistveno razlikujejo od tistih, ki so optimalni za encim . Zvezdna dejavnost lahko se zgodi zaradi prisotnosti Mg2+, kot je na primer v HindIII.

Priporočena: